Kiểm soát chất lượng PCR bằng cách sử dụng máy đo quang phổ vi thể tích microvolume UV-Visible spectrophotometry

Nghiên cứu sinh học phân tử thường xuyên sử dụng phản ứng chuỗi polymerase (PCR) để nghiên cứu các axit nucleic như DNA và RNA. Các thí nghiệm PCR, qPCR hoặc RT-qPCR chính xác yêu cầu các axit nucleic ban đầu phải có nồng độ cụ thể và không có chất tạp nhiễm. Kiểm soát chất lượng là cần thiết để đảm bảo các ứng dụng sau đó không bị ảnh hưởng xấu. Trong tài liệu này, chúng tôi trình bày một số ghi chú ứng dụng chứng minh cách Thermo Scientific™ Máy quang phổ UV-Vis NanoDrop One/OneC và NanoDrop Eight Microvolume, với Thermo Scientific Acclaro™ Công nghệ Sample Intelligence tích hợp trong phần mềm có thể cung cấp thông tin chính xác về axit nucleic và sự hiện diện của các chất tạp nhiễm như các thuốc thử tách chiết còn sót lại.

Phân tích thể tích vi mô được hỗ trợ bởi máy quang phổ NanoDrop và công nghệ Acclaro có nhiều ứng dụng tiềm năng. Một ghi chú ứng dụng cho thấy cách DNA đậu nành có thể được thử nghiệm trong quá trình tìm kiếm cây trồng chuyển gen hoặc GMO. Các ghi chú bổ sung nêu chi tiết cách sử dụng các thiết bị NanoDrop để xác định phenol, protein và chất tạp nhiễm axit nucleic ngoại sinh để kiểm soát chất lượng qPCR và RT-qPCR.

Ngoài ra, tài liệu này còn có câu trả lời cho các Câu hỏi thường gặp về tính năng Nhận dạng chất tạp nhiễm (ID) của Acclaro. như một bài viết về Thông tin tối thiểu để xuất bản Hướng dẫn về Thí nghiệm PCR định lượng thời gian thực (MIQE).

Hướng dẫn của MIQE đề xuất sử dụng tỷ lệ độ tinh khiết A260/A280 làm phương pháp xác định độ tinh khiết của mẫu axit nucleic được tách chiết. Tỷ lệ độ tinh khiết A260/A280, mặc dù có thể chấp nhận được để xác định độ tinh khiết của axit nucleic, nhưng lại thiếu thông tin liên quan đến chất tạp nhiễm. Công nghệ Acclaro được tích hợp trong phần mềm NanoDrop xác định chất phân tích tạp nhiễm và báo cáo nồng độ mẫu đã hiệu chỉnh. Chỉ báo về chất tạp nhiễm mẫu cung cấp thông tin chi tiết hữu ích cho người thử nghiệm và có thể áp dụng tối ưu hóa quy trình làm việc tiếp theo trước qPCR hoặc RT-qPCR. Tài liệu hướng dẫn ứng dụng này nhằm mục đích cung cấp hướng dẫn hữu ích về cách sử dụng máy quang phổ NanoDrop One.

OneC và NanoDrop Eight, tích hợp công nghệ Acclaro Sample Intelligence, để đánh giá định lượng axit nucleic và chất tạp nhiễm. Với kiến thức này, các nhà nghiên cứu có thể thiết kế các quy trình làm việc tách chiết thành công và đảm bảo các lần chạy qPCR tiếp theo hoặc các phân tích sau đó khác hiệu quả.

Danh mục nội dung:

• Phát hiện DNA đậu nành và GMO bằng PCR
• Câu hỏi thường gặp về Acclaro
• Phát hiện protein/phenol Acclaro cho thành công của PCR
• Phát hiện DNA/RNA Acclaro cho thành công của PCR
• Hướng dẫn MIQE cho PCR